MM_FS_CNJ_0123 出口肉及肉制品中乙烯利残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0123出口肉 肉制品 乙烯利 残留量 气相色谱法 外标法定量

MM_FS_CNJ_0123

      出口肉及肉制品中乙烯利残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口猪肉中乙烯利残留量的检验。

2.原理概要

    试样中的乙烯利残留用甲醇提取，提取液经冷冻除去脂肪和蜡质，然后浓缩。待测物再用乙醚提取并经重氮甲烷衍生化，使乙烯利衍生化成二甲基乙烯利后，用配有氮磷检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    氢氧化钾；

    甲醇：重蒸馏；

    N-甲基-N-亚硝基-对甲苯磺酰胺；

    无水乙醇；

    无水乙醚：重蒸馏；

    甲醇-盐酸(38%)溶液(90＋10)；

    无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置于密封容器中备用；

    乙烯利标准品：纯度≥99%；

    乙烯利标准溶液：准确称取适量的乙烯利标准品，用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。根据需要再用甲醇稀释标准储备液以制备适当浓度的标准工作液；

注：配制标准溶液时，均应使用聚乙烯器皿。

    重氮甲烷溶液：将盛有氢氧化钾水溶液(0.6g/mL)10mL，乙醇35mL及乙醚10mL的混合液的双口蒸馏瓶置于磁力搅拌器加热板上的水浴中。将搅拌子放入瓶中，接上滴液漏斗和高效冷凝器，冷凝器后串联两个125mL的烧瓶作为接收瓶。在第二个烧瓶中放有10mL乙醚，且将入口管插到乙醚液面以下。将这两个接收瓶置于冰水浴中。将水浴加温至70℃，边用磁力搅拌器搅拌，边从滴液漏斗中滴加N-甲基-N-亚硝基-对甲苯磺酰胺的乙醚溶液(21.5g/140mL)。滴完全部溶液的时间控制在20min以上。当蒸馏液呈淡黄色时，停止蒸馏。将两个接收瓶中的液体合并，作为重氮甲烷溶液。如果含杂质太多可再重蒸馏。此溶液密闭置于冰箱中保存，保存期为一个月。

3.2.仪器

    气相色谱仪并配有氮磷检测器；

    超声波浴；

    快速混合器；

    离心器：6000r/min；

    聚乙烯烧瓶：100mL，具塞；

    聚乙烯烧杯：250mL；

    微量注射器：10μL或5μL。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如：包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。从每件中取一袋作为原始样品，其总量不少于2kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。

    如每件中无小包装或有小包装但每袋重量超过2kg者，则可用灭菌的锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于100g，混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的总量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

4.4.试样制备

    从原始样品中分取出约1kg，经充分绞碎、混匀，均分成两份，分别装入清洁的容器内，作为试样。加封并标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取约20g试样(精确至0.1g)于聚乙烯烧杯中，加入甲醇-盐酸(90＋10)溶液0.5mL和甲醇40mL，于超声波浴中提取5min。转入离心管离心(6000r/min)2min后，用聚乙烯吸管将上部清液吸入具塞100mL聚乙烯烧瓶中。残渣再用40mL甲醇按上述步骤提取一次，合并提取液于同一聚乙烯烧瓶中。

5.2.净化

    将盛有甲醇提取液的聚乙烯烧瓶，放入－18℃以下的冰柜中冷冻4h。取出后迅速转入离心管中离心(6000r/min)5min。将上层清液倾入用二甲基二氯硅烷处理过的250mL心形瓶中，剩下的残渣用2mL冷冻过的甲醇洗涤，洗液转移到同一个心形瓶中。用旋转蒸发器在30～35℃水浴上浓缩至约60mL。将浓缩液转移到用二甲基二氯硅烷处理过的100mL容量瓶中，用少量甲醇洗涤心形瓶，洗液并入容量瓶内。用甲醇定容。

5.3.衍生化

    吸取10.0mL上述溶液，放入15mL具塞刻度离心管中，在干燥氮气流下于30～35℃水浴中浓缩至约1.5mL。加入0.5mL甲醇-盐酸溶液(90＋10)和8mL无水乙醚，充分混合，放置10min。将上层清液倾入另一个具塞刻度管中，用2×1mL无水乙醚洗涤残渣。洗液并入上述清液中。于氮气流下在30～35℃水浴上浓缩至约1mL。在通风柜内，向浓缩液里滴加重氮甲烷溶液，直至黄色不褪为止。盖严塞子，放置15min。用氮气流把过量的重氮甲烷吹除。再用2×5mL水洗涤，每次离心(6000r/min)2min，弃去下层水相。用氮气流在30～35℃水浴中浓缩至约0.8mL，用无水乙醚稀释到1.00mL。溶液经用约0.5g无水硫酸钠脱水后供气相色谱测定。

5.4.标准溶液的衍生化

    取适量的乙烯利标准工作液，置于100mL具塞聚乙烯烧瓶里，加入重氮甲烷溶液，直到黄色不褪为止。盖紧瓶塞，放置15min。用氮气流把过量的重氮甲烷吹除，这时溶液变为无色。将烧瓶置于30～35℃水浴中在氮气流下浓缩至近干。用无水乙醚溶解残渣并稀释至所取标准工作液的同样体积。

5.5.测定

5.5.1.气相色谱条件

色谱柱：不锈钢柱，2m×3mm(内径)，填充物为3%(m/m)FFAP涂于Chromosorbg,AW,DMCS(60～80目)；

载气：氮气，纯度≥99.9%，50mL/min；

氢气：4mL/min；

空气：175mL/min；

色谱柱温度：145℃；

进样口温度：230℃；

检测器温度：300℃；

进样量：1μL。

5.5.2.气相色谱测定

根据试样中被测农药含量情况，选定峰高相近的衍生化的标准工作溶液。标准工作溶液和待测样液中农药衍生化物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，乙烯利衍生化物(二甲基乙烯利)的保留时间约为1.6min。

5.6.空白试验

    除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

6.结果计算

    用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中乙烯利的残留含量：

式中：X——试样中乙烯利残留含量，mg/kg；

h——样液中二甲基乙烯利的色谱峰高，mm；

h_s——标准工作液中二甲基乙烯利的色谱峰高，mm；

c——标准工作液中乙烯利的浓度，μg/mL；

V——样液最终定容体积，mL；

m——最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

7.低限、回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法测定低限为0.01mg/kg。

7.2.回收率

    猪肉中乙烯利的添加浓度及其回收率的实验数据：

0.010mg/kg时，回收率为84.6%；

0.10mg/kg时，回收率为86.1%；

1.0mg/kg时，回收率为90.2%。

8.来源：

    SN  0705—1997