MM_FS_CNJ_0099 出口肉及肉制品中二硝甲酚残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0099出口 肉 肉制品 二硝甲酚 残留量 气相色谱法 外标法

MM_FS_CNJ_0099

      出口肉及肉制品中二硝甲酚残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口鸡肉中二硝甲酚(4，6-二硝基邻甲酚)残留量的检验。

2.原理概要

    试样中二硝甲酚残留用丙酮提取，提取液经浓缩，加氯化钠水溶液和正己烷进行液液分配。正己烷提取液经浓缩，加重氮甲烷进行甲基化，生成的二硝甲苯甲醚(4，6-二硝基甲苯甲醚)再经弗罗里硅土柱净化。用配有氮磷检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    丙酮；

    正己烷：重蒸馏；

    丙酮-正己烷(1＋1)；

    无水硫酸钠：650℃灼烧4h，贮于密封容器中备用；

    弗罗里硅土小柱：PT-florisil，净化用(2g)；

    氯化钠溶液：饱和的水溶液；

    二硝甲酚(4，6-二硝基邻甲酚)标准品：纯度≥99%；

    二硝甲酚标准溶液：准确称取适量的二硝甲酚标准品，用少量苯溶解，然后用正己烷配成浓度为100μg/mL的标准储备溶液。根据需要再用正己烷稀释储备液以制备适当浓度的标准工作溶液；

    重氮甲烷试剂：在一125mL的蒸馏瓶中加入35mL乙醇、10mL乙醚和10mL氢氧化钾水溶液(6g/10mL)。放入磁棒，并固定在磁力搅拌加热板上的水浴中。连接漏斗和冷凝器并串联两个125mL锥形瓶，锥形瓶中各置有10mL乙醚。冷凝器的收集管插入乙醚液面下。锥形接收瓶置于冰浴中。于滴液漏斗内盛有21.5g的N-甲基-N-亚硝基-p-甲苯磺酰胺溶于140mL乙醚的溶液(重氮试剂)。加热水浴至70℃，进行蒸馏，蒸馏瓶内溶液边用磁棒搅拌，边滴加重氮试剂，滴完全部溶液的时间控制在20min以上。当馏出液近于无色时，停止蒸馏。将两个锥形接收瓶中的溶液合并，并在70℃水浴上重蒸馏。馏出液为重氮甲烷试剂，密封，并于－18℃保存。保存期一个月。

3.2.仪器

    绞肉机；

    振荡器；

    无水硫酸钠柱：7.5cm×1.5cm(内径)，内装5cm高无水硫酸钠；

    旋转蒸发器；

    微量注射器：10μL；

    气相色谱仪并配有氮磷检测器。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件为一个检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品；原始样品总量不少于2kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。

4.4.试样制备

    从每袋原始样品中取部分有代表性样品，用绞肉机绞碎，混匀，用四分法缩分出不少于500g，装入清洁容器内作为试样，加封后，标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取试样约10g(精确至0.1g)于一250mL具塞锥形瓶中，加入50mL丙酮，振荡提取30min。将提取液过滤于一100mL容量瓶中，残渣用50mL丙酮洗涤，洗液经过滤并入上述容量瓶中，定容。取50mL提取液，旋转蒸发至约1～2mL。

    将浓缩液转移至预先盛有50mL氯化钠溶液和25mL正己烷的一125mL分液漏斗中，振荡1min后，静置分层。将水层转入另一125mL分液漏斗中。水层中再加入25mL正己烷，按上述方法重复提取一次。合并正己烷层并使通过无水硫酸钠柱脱水，在40℃水浴中用旋转蒸发器减压浓缩或在氮气流下浓缩至1～2mL。

5.2.甲基化

    于浓缩液中加入1mL重氮甲烷试剂，在常温下反应15min并不时摇动。在氮气流下将溶液吹至近干后，用1mL正己烷溶解。

5.3.净化

    用10mL正己烷预洗弗罗里硅土小柱，将上述正己烷溶液注入小柱中，再注入5mL正己烷，弃去流出液。用5mL丙酮-正己烷(1＋1)洗脱(洗脱流速为1～2mL/min)。收集全部洗脱液至小试管中。用氮气流吹干后准确加入1mL正己烷溶解。溶液供气相色谱测定。

5.4.标准品的甲基化

    取适用浓度的标准工作溶液，按5.2进行甲基化反应，制成正己烷溶液。溶液体积稀释成与所取标准工作液的体积相同。

5.5.测定

5.5.1.色谱条件

色谱柱：BP21石英毛细管柱，25m×0.53mm(内径)×0.5μm(膜厚)；

色谱柱温度：120℃(2min)  ^15℃/min   220℃；

进样口温度：230℃；

检测器温度：250℃；

载气：氮气，纯度≥99.99%，2mL/min；

尾吹气：氮气，纯度≥99.99%，30mL/min；

氢气：3mL/min；

空气：120mL/min；

进样方式：无分流进样；

进样量：1μL。

5.5.2.色谱测定

    根据试样中被测农药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中农药衍生物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，二硝甲酚衍生物的保留时间约为10min。标准品衍生物的色谱图见附录A中图A1。

5.6.空白试验

    除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

7.结果计算

    用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中二硝甲酚残留量：

式中：X——试样中二硝甲酚残留含量，mg/kg；

h——样液中二硝甲酚衍生物的峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中二硝甲酚衍生物的峰高，mm；

c_s——标准工作溶液中二硝甲酚的浓度，μg/mL；

V——最终样液的体积，mL；

m——最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

7.低限、回收率的测定

7.1.低限

    本方法的测定低限为0.02mg/kg。

7.2.回收率

    鸡肉中二硝甲酚添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.02mg/kg时，回收率为84.6%；

在0.10mg/kg时，回收率为93.0%；

在0.20mg/kg时，回收率为.5%。

8.来源：

    SN  0707—1997